核酸提取類試劑盒采用異硫氰酸胍及表面活性劑聯(lián)合裂解細(xì)胞技術(shù),添加*的病毒凝集劑,不需要進(jìn)行仿抽提,可從細(xì)胞培養(yǎng)物、血漿、血清、分泌液、腹水、拭子等的樣本中快速提取痕量的病毒或細(xì)胞的核酸(DNA和RNA)。 1、取待抽提的血清50μl置于微型離心管中,加入200μl抽提A液,顛倒數(shù)次充分混勻;(混勻后室溫放置5分鐘可達(dá)到效果)
2、加入250μl抽提B液,顛倒數(shù)次充分混勻(混勻后室溫放置10min可達(dá)效果),13000rpm離心10min,倒去上清;
3、加入200μl抽提C液,顛倒數(shù)次混勻,13000rpm離心5min,吸棄上清(盡量去掉上清);
4、室溫放置或50℃加熱5min晾干,加入25μl樣本稀釋液混懸沉淀物,短暫離心使液體落于管底部,上清液即為提取得到的核酸。
注:對(duì)于分泌物或棉拭子,先用適量無菌生理鹽水把拭子上的分泌物洗入離心管中,或者把拭子泡在無菌生理鹽水中,捻動(dòng)使分泌物分散于液體中,然后高速離心5min后,去除大部分上清,余下的樣本即應(yīng)用上述步驟抽提核酸。
注意事項(xiàng):
1、如果抽提的是病毒RNA,即提即用,保存請(qǐng)置于-80℃。
2、抽提A液及抽提B液可根據(jù)所用的提取物的量等倍加大用量。
3、抽提A液低溫保存會(huì)有絮狀物析出或凝結(jié)是正?,F(xiàn)象,使用前置于50℃使融化,顛倒混勻,不影響使用。
4、血漿樣本盡管也能直接提取,但先用紅細(xì)胞裂解液處理去掉紅細(xì)胞,效果將更好。
5、加入樣本稀釋液后仍有部分沉淀不溶解是正常現(xiàn)象,不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。